In het tweede deel is de ooit sinistere Gru verliefd geworden op agente Lucy Wilde en is hij uit liefde voor haar en zijn drie geadopteerde dochters Margo, Edith en Agnes van kant gewisseld: samen met zijn vrouw vecht hij nu tegen schurken. Onder hen Balthazar Bratt, een superschurk en jaren 80-fan met schoudervullingen en een mullet, die uit is op een enorme roze diamant. Terwijl Gru druk bezig is met de jacht op Bratt, krijgt hij bezoek van zijn tweelingbroer Dru. Hij heeft niet alleen een volle bos haar, maar hij is ook succesvoller en zelfverzekerder dan Gru, die niet eens zijn Minions onder controle kan houden - en dat irriteert hem enorm! Maar dan slaat Balthazar Bratt een duivelse slag en moeten de onwaarschijnlijke broers samenwerken om de wereld te redden.